1 - Cubierta [Seite 1]
2 - Portada [Seite 4]
3 - Página de créditos [Seite 5]
4 - Autores [Seite 6]
5 - Introducción [Seite 8]
6 - Prefacio a la segunda edición [Seite 12]
7 - Instrucciones para el acceso en línea [Seite 433]
8 - Índice de capítulos [Seite 14]
9 - Capítulo 1 - Introducción histórica a la biología celular y la histología [Seite 16]
9.1 - Introducción [Seite 16]
9.2 - Inicios de la biología celular [Seite 16]
9.3 - Teoría celular [Seite 20]
9.4 - Desarrollo de la biología celular gracias al progreso de las técnicas histológicas [Seite 22]
9.5 - La nueva biología celular: la microscopía electrónica y otros desarrollos tecnológicos en microscopía [Seite 26]
9.5.1 - Desarrollos recientes e innovación tecnológica en microscopía [Seite 27]
9.6 - Interacción de la citología y la histología clásicas con otras disciplinas: el origen de la biología celular y molecular mo... [Seite 28]
9.6.1 - Autorradiografía [Seite 30]
9.6.2 - Citoquímica e histoquímica [Seite 30]
9.6.3 - Inmunocitoquímica [Seite 30]
9.6.4 - Cultivos celulares [Seite 31]
9.6.5 - Citometría estática y de flujo [Seite 31]
9.6.6 - Análisis de imagen, morfometría y estereología [Seite 31]
9.6.7 - Hibridación in situ de ácidos nucleicos [Seite 32]
9.6.8 - Citogenética [Seite 32]
9.6.9 - Técnicas de biología molecular. Un ejemplo: la reacción en cadena de la polimerasa [Seite 32]
9.6.10 - Técnicas de análisis genómico y proteómico a gran escala [Seite 33]
9.7 - Bibliografía [Seite 35]
10 - Capítulo 2 - Microscopio óptico: fundamentos y tipos [Seite 39]
10.1 - Introducción [Seite 39]
10.2 - Microscopio simple (lupa o microscopio estereoscópico) [Seite 39]
10.3 - Microscopio óptico compuesto (convencional) [Seite 40]
10.3.1 - Parte mecánica [Seite 40]
10.3.2 - Parte óptica [Seite 42]
10.3.2.1 - Objetivos [Seite 42]
10.3.2.2 - Oculares [Seite 44]
10.3.2.3 - Condensador [Seite 45]
10.3.2.4 - Diafragma [Seite 45]
10.3.2.5 - Sistema de iluminación [Seite 45]
10.3.2.6 - Filtros [Seite 45]
10.4 - Microscopios especiales [Seite 46]
10.4.1 - Microscopio de campo oscuro [Seite 46]
10.4.2 - Microscopio de contraste de fases [Seite 46]
10.4.3 - Microscopio de interferencia [Seite 48]
10.4.4 - Microscopio de polarización [Seite 48]
10.4.5 - Microscopios invertidos [Seite 50]
10.4.6 - Microscopio de fluorescencia [Seite 50]
10.4.7 - Microscopio de luz ultravioleta [Seite 51]
10.4.8 - Microscopio láser confocal [Seite 51]
11 - Capítulo 3 - Procesamiento de muestras para microscopía óptica: fijación, inclusión y microtomía [Seite 57]
11.1 - Introducción [Seite 57]
11.2 - Fijación [Seite 57]
11.2.1 - Tipos de fijación [Seite 58]
11.2.1.1 - Fijación física [Seite 58]
11.2.1.2 - Fijación química [Seite 59]
11.2.1.2.1 - Fijadores entrecruzantes. Formaldehído y glutaraldehído [Seite 59]
11.2.1.2.2 - Fijadores precipitantes [Seite 62]
11.2.1.2.3 - Fijadores oxidantes [Seite 62]
11.2.1.2.4 - Otros fijadores [Seite 63]
11.2.2 - Mezclas de fijadores [Seite 64]
11.2.3 - Reacción de los fijadores con lípidos y carbohidratos [Seite 64]
11.2.4 - Factores que intervienen en la fijación química [Seite 67]
11.2.4.1 - Procedimiento de fijación: perfusión e inmersión [Seite 67]
11.2.4.2 - Penetración (difusión) del fijador y tiempo de fijación [Seite 69]
11.2.4.3 - Disolvente, osmolaridad y temperatura de fijación [Seite 70]
11.2.4.4 - Efecto de la fijación en estudios moleculares [Seite 71]
11.3 - Inclusión [Seite 72]
11.3.1 - Inclusión en parafina [Seite 72]
11.3.1.1 - Descalcificación [Seite 74]
11.3.2 - Otros medios de inclusión [Seite 75]
11.4 - Microtomía [Seite 76]
11.4.1 - Microtomo de mano [Seite 77]
11.4.2 - Microtomo de deslizamiento [Seite 77]
11.4.3 - Microtomo de rotación o de Minot [Seite 77]
11.4.4 - Criostato o criotomo [Seite 78]
11.4.5 - Vibratomo [Seite 79]
11.4.6 - Recogida de las secciones tras el corte [Seite 80]
11.5 - Extensiones [Seite 81]
11.6 - Bibliografía [Seite 82]
12 - Capítulo 4 - Técnicas de tinción en histología [Seite 87]
12.1 - Introducción [Seite 87]
12.2 - Colorantes histológicos [Seite 87]
12.2.1 - Naturaleza química de los colorantes [Seite 88]
12.2.2 - ¿Cómo se combinan los colorantes con el sustrato? [Seite 89]
12.2.2.1 - Relaciones electrostáticas [Seite 90]
12.2.2.2 - Enlaces coordinados, mordientes y quelantes [Seite 90]
12.2.2.3 - Enlaces covalentes [Seite 91]
12.2.2.4 - Otros mecanismos fisicoquímicos [Seite 91]
12.2.2.4.1 - Puentes de hidrógeno [Seite 91]
12.2.2.4.2 - Interacciones hidrófobas en la disolución diferencial: coloraciones de lípidos [Seite 91]
12.2.2.4.3 - Impregnaciones [Seite 92]
12.2.3 - Metacromasia [Seite 92]
12.2.4 - Nomenclatura de los colorantes [Seite 92]
12.2.5 - Tipos de colorantes [Seite 93]
12.2.5.1 - Según el grupo auxocromo [Seite 93]
12.2.5.2 - Según la estructura química y el grupo cromóforo [Seite 94]
12.2.6 - Glosario de términos relacionados con las tinciones [Seite 97]
12.3 - Tinciones más utilizadas [Seite 98]
12.3.1 - Hematoxilina-eosina [Seite 98]
12.3.1.1 - Hematoxilina: tipos [Seite 98]
12.3.1.2 - Eosina [Seite 100]
12.3.2 - Tricrómicos [Seite 100]
12.3.3 - Giemsa [Seite 102]
12.3.4 - Papanicolaou [Seite 102]
12.4 - Tinciones aplicables a tejidos concretos [Seite 103]
12.5 - Tinciones subcelulares [Seite 104]
12.6 - Impregnaciones argénticas [Seite 106]
12.7 - Colorantes vitales y colorantes de exclusión [Seite 109]
12.7.1 - Tinciones vitales y detección de estructuras óseas en crecimiento [Seite 109]
12.8 - Tinción negativa [Seite 109]
12.9 - Bibliografía [Seite 110]
13 - Capítulo 5 - Técnicas citoquímicas e histoquímicas [Seite 114]
13.1 - Introducción [Seite 114]
13.2 - Técnicas para la detección de polisacáridos [Seite 114]
13.2.1 - Técnica de PAS [Seite 115]
13.2.1.1 - Fijación y fundamentos de la técnica [Seite 115]
13.2.1.2 - Controles [Seite 116]
13.2.2 - Azul alcián [Seite 117]
13.3 - Ácidos nucleicos [Seite 117]
13.3.1 - Feulgen [Seite 117]
13.3.1.1 - Fijación y fundamentos de la técnica [Seite 117]
13.3.2 - Verde de metilo-pironina [Seite 118]
13.4 - Lípidos [Seite 119]
13.4.1 - Sudán negro [Seite 119]
13.5 - Histoenzimología [Seite 119]
13.5.1 - Demostración de fosfatasas (fosfomonoesterasas) [Seite 120]
13.5.1.1 - Detección de la fosfatasa alcalina [Seite 120]
13.5.1.2 - Detección de la fosfatasa ácida [Seite 120]
13.5.2 - Detección de peroxidasas [Seite 121]
13.5.3 - Demostración de la NADPH-diaforasa [Seite 121]
13.5.4 - Demostración de ATPasas [Seite 122]
13.6 - Histoquímica de lectinas [Seite 123]
13.6.1 - Presencia y función de las lectinas [Seite 125]
13.6.2 - Utilidades de las lectinas [Seite 125]
13.6.3 - Métodos de detección en el uso de lectinas [Seite 126]
13.6.3.1 - Método directo [Seite 126]
13.6.3.2 - Método con lectina biotinada [Seite 127]
13.6.3.3 - Método con anticuerpos antilectinas [Seite 127]
13.6.3.4 - Método con carbohidratos marcados [Seite 127]
13.6.3.5 - Métodos para su uso en microscopía electrónica [Seite 127]
13.6.4 - Controles de la técnica [Seite 128]
13.6.4.1 - Controles positivos [Seite 128]
13.6.4.2 - Controles negativos [Seite 128]
13.6.5 - Eliminación de azúcares en las técnicas de lectinas [Seite 128]
13.6.5.1 - Tratamientos químicos [Seite 128]
13.6.5.2 - Rotura específica de azúcares mediante enzimas [Seite 128]
13.6.6 - Aplicaciones de la histoquímica de lectinas en histopatología [Seite 129]
13.7 - Bibliografía [Seite 130]
14 - Capítulo 6 - Técnicas inmunohistoquímicas [Seite 136]
14.1 - Introducción [Seite 136]
14.2 - Anticuerpos [Seite 136]
14.2.1 - Policlonales [Seite 137]
14.2.1.1 - Ventajas de los antisueros policlonales [Seite 138]
14.2.1.2 - Limitaciones de los antisueros policlonales [Seite 138]
14.2.2 - Monoclonales [Seite 138]
14.2.2.1 - Ventajas de los anticuerpos monoclonales [Seite 139]
14.2.2.2 - Limitaciones de los anticuerpos monoclonales [Seite 141]
14.2.3 - Características de un buen antisuero para IHQ [Seite 141]
14.2.4 - Conservación de los antisueros [Seite 141]
14.3 - Técnicas IHQ [Seite 141]
14.3.1 - Técnicas inmunoenzimáticas [Seite 142]
14.3.1.1 - Peroxidasa [Seite 143]
14.3.1.2 - Fosfatasa alcalina [Seite 144]
14.3.1.3 - Técnica de los complejos peroxidasa anti-peroxidasa (PAP) y fosfatasa alcalina anti-fosfatasa alcalina (APAAP) [Seite 144]
14.3.1.4 - Métodos avidina-biotina [Seite 144]
14.3.1.4.1 - Técnica de los complejos avidina-biotina (ABC, avidin-biotin-complex) [Seite 145]
14.3.1.4.2 - Técnica LSAB (labeled streptavidin-biotin) [Seite 145]
14.3.1.5 - Métodos poliméricos [Seite 146]
14.3.1.6 - Métodos de amplificación con tiramida [Seite 146]
14.3.2 - Inmunofluorescencia [Seite 148]
14.3.3 - Oro coloidal [Seite 150]
14.3.3.1 - Ventajas de las técnicas con oro coloidal [Seite 151]
14.3.3.2 - Inconvenientes de las técnicas con oro coloidal [Seite 151]
14.4 - Estudios de colocalización [Seite 151]
14.5 - Inmunomarcaje múltiple [Seite 151]
14.6 - Preservación y detectabilidad del antígeno durante el procesamiento de las muestras [Seite 153]
14.6.1 - Aspectos que afectan a la inmunorreactividad [Seite 154]
14.6.1.1 - Fijación [Seite 154]
14.6.1.2 - Inclusión [Seite 154]
14.6.2 - Tratamientos para desenmascarar antígenos [Seite 154]
14.6.2.1 - Recuperación antigénica mediante proteólisis [Seite 155]
14.6.2.2 - Recuperación antigénica mediante calor [Seite 155]
14.7 - Controles [Seite 155]
14.7.1 - Antisuero primario [Seite 155]
14.7.1.1 - Controles del método: controles positivo y negativo [Seite 157]
14.7.1.2 - Control positivo [Seite 157]
14.7.1.3 - Control negativo [Seite 157]
14.8 - Bibliografía [Seite 158]
15 - Capítulo 7 - Técnicas de localización in situ de ácidos nucleicos: hibridación in situ [Seite 168]
15.1 - Introducción [Seite 168]
15.2 - Generalidades de la hibridación de ácidos nucleicos [Seite 168]
15.2.1 - Factores que condicionan la hibridación de ácidos nucleicos [Seite 169]
15.3 - Hibridación in situ (ISH) [Seite 170]
15.3.1 - Procesamiento del material [Seite 171]
15.3.2 - Preparación de la sonda [Seite 173]
15.3.2.1 - Tipos de sondas según el ácido nucleico [Seite 173]
15.3.3 - Obtención y marcaje de la sonda [Seite 177]
15.3.3.1 - Nick translation [Seite 177]
15.3.3.2 - Random priming [Seite 178]
15.3.3.3 - End-labelling [Seite 178]
15.3.3.4 - Transcripción in vitro. Obtención de ribosondas (sondas de RNA) [Seite 178]
15.3.4 - Tipos de marcaje de la sonda [Seite 179]
15.3.4.1 - Sondas isotópicas [Seite 179]
15.3.4.2 - Sondas no isotópicas [Seite 180]
15.3.5 - Factores que determinan las condiciones de hibridación in situ [Seite 181]
15.3.5.1 - Condiciones de hibridación [Seite 181]
15.3.5.2 - Lavados posthibridación [Seite 182]
15.3.6 - Sistemas de detección del marcaje [Seite 183]
15.3.6.1 - Técnicas autorradiográficas: microautorradiografía [Seite 183]
15.3.6.2 - Detección de marcaje no isotópico [Seite 183]
15.3.7 - Resumen del protocolo de ISH para mRNA [Seite 186]
15.3.8 - Análisis simultáneo de proteína y mRNA mediante técnica combinada ISH e IHQ [Seite 187]
15.3.9 - Controles para las técnicas de ISH [Seite 187]
15.3.9.1 - Controles positivos para ISH de mRNA [Seite 189]
15.3.9.2 - Controles negativos para ISH de mRNA [Seite 189]
15.4 - Hibridación in situ con fluorescencia (FISH) [Seite 189]
15.4.1 - FISH convencional [Seite 190]
15.4.1.1 - Marcaje de las sondas de FISH [Seite 192]
15.4.1.2 - Tipos de sondas [Seite 192]
15.4.2 - Aplicaciones de la FISH convencional [Seite 193]
15.4.3 - Técnicas derivadas de la FISH [Seite 193]
15.4.3.1 - Hibridación genómica comparada (CGH) [Seite 193]
15.4.3.2 - FICTION [Seite 194]
15.4.3.3 - Fiber-FISH [Seite 194]
15.4.3.4 - Cariotipado por FISH de 24 colores: SKY, M-FISH y COBRA FISH [Seite 194]
15.4.3.5 - Bandeo de color [Seite 195]
15.5 - Bibliografía [Seite 195]
16 - Capítulo 8 - Microscopía confocal [Seite 200]
16.1 - Introducción [Seite 200]
16.2 - Fundamentos de la microscopía confocal [Seite 200]
16.2.1 - Componentes de un microscopio confocal [Seite 201]
16.2.2 - Fluorescencia en microscopía confocal [Seite 203]
16.3 - Métodos alternativos de seccionamiento óptico [Seite 204]
16.3.1 - Microscopía de fluorescencia por reflexión interna total (TIRF) [Seite 205]
16.3.2 - Microscopía de disco giratorio [Seite 205]
16.3.3 - Microscopía multifotónica [Seite 206]
16.3.4 - Deconvolución aplicada a la microscopía óptica [Seite 207]
16.4 - Avances en resolución de microscopía óptica [Seite 207]
16.5 - Marcaje fluorescente para estudios de microscopía [Seite 210]
16.5.1 - Fluorocromos reactivos [Seite 211]
16.5.2 - Sondas para marcajes específicos [Seite 212]
16.5.3 - Proteínas fluorescentes [Seite 214]
16.6 - Preparación de muestras para estudios de microscopía [Seite 216]
16.6.1 - Fijación [Seite 216]
16.6.2 - Permeabilización [Seite 218]
16.6.3 - Bloqueo [Seite 218]
16.6.4 - Marcaje [Seite 218]
16.6.5 - Montaje [Seite 219]
16.7 - Aplicaciones de Microscopía confocal en biología [Seite 219]
16.7.1 - Estudios de colocalización [Seite 219]
16.7.2 - Técnica de FRET [Seite 220]
16.7.3 - Estudios de microscopía de células vivas [Seite 224]
16.7.4 - Estudios de fotoblanqueamiento y fotoactivación [Seite 225]
16.8 - Bibliografía [Seite 227]
17 - Capítulo 9 - Técnicas básicas de microscopía electrónica en biología [Seite 231]
17.1 - Introducción [Seite 231]
17.2 - Fundamentos de microscopía electrónica de transmisión [Seite 231]
17.2.1 - Estructura del microscopio electrónico de transmisión [Seite 232]
17.2.1.1 - Cañón de electrones [Seite 232]
17.2.1.2 - Lentes [Seite 233]
17.2.1.3 - Portaobjetos en microscopía electrónica [Seite 234]
17.2.1.4 - Sistema de visualización [Seite 235]
17.2.1.5 - Sistema de vacío [Seite 236]
17.2.1.6 - Otros componentes [Seite 236]
17.2.2 - Resolución del microscopio electrónico [Seite 237]
17.2.3 - Formación de la imagen en el microscopio electrónico de transmisión [Seite 237]
17.2.3.1 - Densidad electrónica del material biológico [Seite 239]
17.2.3.2 - Algunos factores que influyen en la formación de la imagen en el TEM [Seite 241]
17.2.3.2.1 - Factores dependientes de la muestra [Seite 241]
17.2.3.2.2 - Factores dependientes del microscopio [Seite 242]
17.2.3.2.3 - Apertura del diafragma del objetivo [Seite 242]
17.3 - Preparación de muestras para TEM [Seite 242]
17.3.1 - Técnicas convencionales de procesamiento [Seite 243]
17.3.1.1 - Fijación [Seite 243]
17.3.1.1.1 - Fijación química [Seite 243]
17.3.1.1.2 - Otros factores que afectan a la fijación [Seite 243]
17.3.1.2 - Inclusión [Seite 245]
17.3.1.3 - Ultramicrotomía [Seite 245]
17.3.1.4 - Contraste positivo [Seite 245]
17.3.2 - Estudio de extensiones [Seite 246]
17.3.2.1 - Contraste negativo en extensiones [Seite 247]
17.3.2.2 - Sombreado metálico [Seite 249]
17.3.3 - Réplicas [Seite 249]
17.3.4 - Criotécnicas [Seite 250]
17.3.4.1 - Criofractura y criograbado [Seite 251]
17.3.5 - Técnicas de marcaje en microscopía electrónica [Seite 252]
17.3.5.1 - Autorradiografía [Seite 252]
17.3.5.2 - Métodos citoquímicos [Seite 252]
17.3.5.2.1 - Métodos citoquímicos generales [Seite 253]
17.3.5.2.2 - Histoenzimología ultraestructural [Seite 253]
17.3.5.2.3 - Inmunocitoquímica ultraestructural [Seite 254]
17.3.5.2.3.1 - Marcadores para inmunocitoquímica al microscopio electrónico [Seite 254]
17.4 - Otros tipos de microscopio electrónico: SEM, STEM, EFTEM y FIB [Seite 257]
17.4.1 - Fundamentos del SEM [Seite 257]
17.4.1.1 - Formación de la imagen en el SEM [Seite 257]
17.4.1.2 - Procesamiento de las muestras biológicas para el SEM [Seite 259]
17.4.1.3 - Aplicaciones del SEM [Seite 259]
17.4.2 - EFTEM [Seite 260]
17.4.3 - STEM (scanning transmission electron microscope) [Seite 261]
17.4.4 - Microscopio de FIB (focused ion beam) [Seite 261]
17.5 - Bibliografía [Seite 262]
18 - Capítulo 10 - Microscopio de fuerza atómica: fundamentos y aplicaciones en biología y biomedicina [Seite 271]
18.1 - Introducción [Seite 271]
18.2 - Descripción de la técnica [Seite 271]
18.2.1 - Requerimientos básicos de un MFA [Seite 271]
18.2.2 - Preparación de muestras [Seite 273]
18.2.3 - Uso del MFA en modo de visualización [Seite 273]
18.2.4 - Resolución temporal y espacial del MFA en modo imagen [Seite 274]
18.2.5 - Uso del MFA en modo sensor/actuador de fuerzas [Seite 274]
18.2.6 - Uso del MFA como sensor/actuador molecular [Seite 275]
18.3 - Aplicaciones biológicas del MFA [Seite 277]
18.4 - Aplicaciones biomédicas del MFA [Seite 277]
18.5 - Bibliografía [Seite 279]
19 - Capítulo 11 - Análisis de imagen en histología [Seite 283]
19.1 - Introducción [Seite 283]
19.2 - imagen [Seite 284]
19.2.1 - Análisis de imagen en histología [Seite 287]
19.3 - Procesamiento de imágenes [Seite 287]
19.4 - Formatos de imagen [Seite 290]
19.4.1 - TIFF [Seite 291]
19.4.2 - GIF [Seite 291]
19.4.3 - PNG [Seite 291]
19.4.4 - BMP [Seite 292]
19.4.5 - JPEG [Seite 292]
19.4.6 - JPEG 2000 [Seite 292]
19.4.7 - TGA [Seite 292]
19.5 - Almacenamiento de imágenes [Seite 292]
19.5.1 - Dispositivos magnéticos [Seite 292]
19.5.2 - Discos ópticos [Seite 294]
19.6 - Procesamiento de imágenes [Seite 295]
19.6.1 - Aumento de contraste [Seite 295]
19.6.2 - Inversión [Seite 296]
19.6.2.1 - Creación de seudocolores [Seite 296]
19.6.3 - Corrección de la iluminación [Seite 297]
19.6.4 - Convoluciones [Seite 297]
19.6.5 - Dilatación, erosión, opening y closing [Seite 297]
19.6.6 - Operadores booleanos [Seite 298]
19.6.7 - Operaciones geométricas y espaciales [Seite 299]
19.6.8 - Edición de la imagen [Seite 299]
19.7 - Segmentación [Seite 299]
19.7.1 - Métodos basados en el histograma de la imagen [Seite 299]
19.7.2 - Métodos por agrupamiento (K-means clustering) [Seite 300]
19.7.3 - Segmentación por líneas divisorias (watershed) [Seite 300]
19.7.4 - Segmentación de regiones homogéneas [Seite 300]
19.8 - Realización de mediciones [Seite 302]
19.8.1 - Mediciones morfológicas [Seite 302]
19.8.1.1 - Número de objetos [Seite 302]
19.8.1.2 - Área de objetos [Seite 302]
19.8.1.3 - Perímetro [Seite 302]
19.8.1.4 - Diámetro [Seite 304]
19.8.1.5 - Feret [Seite 304]
19.8.1.6 - Orientación [Seite 304]
19.8.1.7 - Centro de masas [Seite 304]
19.8.1.8 - Factores de forma [Seite 304]
19.8.1.9 - Distancia entre objetos [Seite 304]
19.8.1.10 - Dimensión fractal [Seite 305]
19.8.2 - Mediciones densitométricas [Seite 305]
19.8.3 - Mediciones combinadas [Seite 306]
19.8.4 - Programas de análisis de imagen [Seite 307]
19.9 - Bibliografía [Seite 307]
20 - Capítulo 12 - Métodos estereológicos en histología y biología celular [Seite 313]
20.1 - Introducción [Seite 313]
20.2 - Información elemental sobre análisis dimensional [Seite 314]
20.3 - Relaciones entre el mundo real y el histológico [Seite 314]
20.4 - ¿En qué consiste la estimación estereológica? [Seite 315]
20.5 - Algunas definiciones de interés en estereología [Seite 315]
20.5.1 - Espacio de referencia [Seite 315]
20.5.2 - Sesgo [Seite 316]
20.5.3 - Imprecisión [Seite 316]
20.5.4 - Variabilidad y sus componentes [Seite 317]
20.6 - El muestreo en estereología es esencial [Seite 317]
20.6.1 - Tipos de muestreo [Seite 318]
20.7 - Sondas en estereología: el retículo de puntos [Seite 318]
20.8 - Estimación del volumen de un objeto. Principio de Cavalieri [Seite 320]
20.9 - Uso de los retículos de puntos para la estimación de fracciones de volumen [Seite 321]
20.10 - Recuento de partículas [Seite 321]
20.10.1 - Requerimientos para el recuento no sesgado de partículas [Seite 323]
20.10.2 - Disector óptico [Seite 323]
20.10.3 - Principio del fraccionador [Seite 324]
20.10.4 - Fraccionador óptico [Seite 324]
20.10.5 - Recuento mediante el disector óptico [Seite 324]
20.11 - Bibliografía [Seite 326]
21 - Capítulo 13 - Técnicas de cultivo celular [Seite 338]
21.1 - Introducción [Seite 338]
21.2 - Características de la célula cultivada [Seite 338]
21.3 - Equipamiento de un laboratorio de cultivo celular [Seite 341]
21.3.1 - Cabina de flujo laminar [Seite 341]
21.3.2 - Incubador de CO2 [Seite 343]
21.3.3 - Técnicas de recuento celular [Seite 343]
21.4 - Ambiente del cultivo [Seite 345]
21.4.1 - Sustrato [Seite 345]
21.4.2 - Composición del medio [Seite 346]
21.4.3 - Composición de la fase gaseosa [Seite 348]
21.4.4 - Temperatura [Seite 348]
21.5 - Bibliografía [Seite 349]
22 - Capítulo 14 - Proliferación, muerte celular y angiogénesis [Seite 359]
22.1 - Introducción [Seite 359]
22.2 - Análisis del ciclo y de la proliferación celular [Seite 360]
22.2.1 - Introducción [Seite 360]
22.2.2 - Análisis de la proliferación y del ciclo celular en células aisladas [Seite 361]
22.2.2.1 - Ciclo celular [Seite 361]
22.2.2.2 - Análisis de la proliferación mediante recuento celular [Seite 364]
22.2.2.3 - Análisis de la proliferación y de la citotoxicidad mediante técnicas colorimétricas de la actividad metabólica celular [Seite 364]
22.2.2.4 - Análisis del número de células en fase S mediante bromodeoxiuridina o timidina tritiada [Seite 366]
22.2.3 - Análisis de la proliferación celular en cortes de tejidos [Seite 366]
22.2.3.1 - Índice mitótico [Seite 366]
22.2.3.2 - Índice de proliferación mediante inmunohistoquímica para Ki-67, PCNA y BrdU [Seite 366]
22.3 - Análisis de la muerte celular. Conceptos de apoptosis, necrosis, senescencia y autofagia [Seite 367]
22.3.1 - Introducción [Seite 367]
22.3.2 - Análisis de la apoptosis en células aisladas [Seite 371]
22.3.2.1 - Técnicas basadas en la detección de la fragmentación del DNA [Seite 371]
22.3.2.2 - Técnicas basadas en la detección de alteraciones de la membrana plasmática [Seite 371]
22.3.2.3 - Cuantificación de caspasa 3 activa, PARP y otras proteínas relacionadas con la apoptosis [Seite 372]
22.3.3 - Análisis de la apoptosis en cortes de tejidos [Seite 372]
22.3.3.1 - Análisis morfológico [Seite 372]
22.3.3.2 - Técnica de TUNEL [Seite 372]
22.3.4 - Métodos de cuantificación de células TUNEL-positivas [Seite 374]
22.3.5 - Inmunohistoquímica para detectar caspasa 3 activa y otras proteínas relacionadas con la apoptosis [Seite 375]
22.4 - Angiogénesis tumoral [Seite 375]
22.4.1 - Introducción [Seite 375]
22.4.2 - Métodos in vitro para la cuantificación de la angiogénesis [Seite 376]
22.4.3 - Métodos ex vivo para la cuantificación de la angiogénesis [Seite 378]
22.4.4 - Métodos in vivo para la cuantificación de la angiogénesis [Seite 379]
22.4.5 - Métodos para detectar y cuantificar la angiogénesis en cortes de tejidos [Seite 381]
22.4.5.1 - Cálculo de la densidad microvascular [Seite 382]
22.4.5.2 - Método de Chalkley [Seite 382]
22.4.5.3 - Grado vascular [Seite 383]
22.4.5.4 - Sistemas de análisis de imagen multiparamétrico y análisis estereológico [Seite 383]
22.4.6 - Consideraciones importantes para la determinación de la angiogénesis [Seite 383]
22.5 - Bibliografía [Seite 384]
23 - Capítulo 15 - Células madre e ingeniería de tejidos [Seite 394]
23.1 - Células madre [Seite 394]
23.1.1 - Definición y clasificación [Seite 394]
23.1.2 - Métodos de propagación y diferenciación de células madre [Seite 396]
23.1.3 - Métodos de caracterización de células madre [Seite 398]
23.1.4 - Plasticidad de las células madre de individuo adulto [Seite 402]
23.2 - Ingeniería de tejidos [Seite 403]
23.2.1 - Definición [Seite 404]
23.2.2 - Estrategias [Seite 405]
23.2.3 - Cultivo ex vivo de células madre somáticas [Seite 405]
23.2.4 - Reconstrucción de un tejido ex vivo: células, matrices y biorreactores [Seite 408]
23.2.5 - Biorreactores [Seite 409]
23.2.6 - Sistemas abiertos y cerrados [Seite 410]
23.2.7 - Activación de células madre endógenas, locales o de tejidos distantes [Seite 411]
23.2.8 - Células locales [Seite 411]
23.2.9 - Movilización y reclutamiento de células madre de otros tejidos [Seite 412]
23.2.10 - Limitaciones y retos de la ingeniería de tejidos [Seite 412]
23.3 - Tratamiento de enfermedades degenerativas con células madre de individuo adulto: presente y futuro [Seite 413]
23.3.1 - Enfermedades cardiovasculares [Seite 413]
23.3.2 - Enfermedades y lesiones oculares [Seite 415]
23.3.3 - Lesiones de la piel [Seite 416]
23.3.4 - Enfermedades del aparato digestivo [Seite 416]
23.3.5 - Diabetes mellitus de tipo I [Seite 416]
23.3.6 - Enfermedades del sistema nervioso central y de la médula espinal [Seite 416]
23.4 - Conclusiones [Seite 417]
23.5 - Bibliografía [Seite 418]
24 - Índice alfabético [Seite 426]