Elektrophorese leicht gemacht

TEIL I: GRUNDLAGEN

ÜBERSICHT
ELEKTROPHORESE
Allgemeines
Elektrophorese in nichtrestriktiven Gelen
Agarose-Gel-Elektrophorese
Polyacrylamid-Gel-Elektrophorese von niedermolekularen Substanzen
Elektrophorese in restriktiven Gelen
Der Ferguson-Plot
Agarose-Gel-Elektrophorese
Polyacrylamid-Gel-Elektrophorese von Nukleinsäuren
Polyacrylamid-Gel-Elektrophorese von Proteinen
Literatur
ISOTACHOPHORESE
Wanderung mit gleicher Geschwindigkeit
Trennung der Substanzen in Form einer Kette ("ion train")
Zonenschärfungs-Effekt
Konzentrationsregulierungs-Effekt
Literatur
ISOELEKTRISCHE FOKUSSIERUNG
Prinzip
Gele für die IEF
Temperatur
Kontrolle der pH-Gradienten
Arten von pH-Gradienten
Trägerampholyten-pH-Gradienten
Immobilisierte pH-Gradienten
Präparative Isoelektrische Fokussierung
Titrationskurvenanalyse
Literatur
HOCHAUFLÖSENDE ZWEIDIMENSIONALE ELEKTROPHORESE
IEF in Streifen mit immobilisierten pH-Gradienten
SDS-PAGE
Proteomik
Literatur
PROBENVORBEREITUNG
Protein-Quantifizierung
Vorbereitung von nativen Proben
Proben für die SDS-Elektrophorese
Proben für die hochauflösende 2D PAGE
Literatur
DETEKTION
Fixierung
Färbungen nach der Trennung
Markierung vor der Trennung
Differenz-Gel-Elektrophorese (DIGE)
Aufnahme der Trennergebnisse, Bildanalyse, Spot-Picken
Literatur
BLOTTING
Transfermethoden
Blotmembranen
Puffer für elektrophoretische Transfers
Allgemeine Anfärbung
Blockieren
Spezial-Detektion
Proteinsequenzierung
Transfer-Probleme
Elektroelution von Proteinen aus Gelen
Literatur

TEIL II: AUSRÜSTUNG UND METHODEN
Apparative Ausrüstung
Verbrauchsmaterial
Verwendete Chemikalien

Methode 1: PAGE von Farbstoffen
Methode 2: Agarose- und Immun-Elektrophoresen
Methode 3: Titrationskurvenanalyse
Methode 5: Native PAGE in amphoteren Puffern
Methode 6: Agarosegel-IEF
Methode 7: PAGIEF in rehydratisierten Gelen
Methode 7: Horizontale SDS-Polyacrylamid-Elektrophorese
Methode 8: Vertikale PAGE
Methode 9: Blau-Nativ PAGE
Methode 10: IEF in immobilisierten pH-Gradienten
Methode 11: Hochauflösende 2D-Elektrophorese
Methode 12: 2D Differenz-Gel-Elektrophorese (DIGE)
Methode 13: PAGE von DNA-Fragmenten

ANHANG
Problemlösungen
Sachregister