Praxis der Hochleistungs-Flüssigchromatographie

WICHTIGE UND NÜTZLICHE GLEICHUNGEN FÜR DIE HPLC
EINLEITUNG
HPLC: Eine leistungsfähige Trennmethode
Ein erstes HPLC-Experiment
Die flüssigchromatographischen Trennverfahren
Die HPLC-Apparatur
Sicherheit am HPLC-Arbeitsplatz
Vergleich von Hochleistungs-Flüssigchromatographie und Gaschromatographie
Vergleich von Hochleistungs-Flüssigchromatographie und Kapillarelektrophorese
Verschiedene Maßeinheiten
Wissenschaftliche Zeitschriften
Empfehlenswerte Bücher
THEORETISCHE GRUNDLAGEN
Der chromatographische Prozess
Bandenverbreiterung
Das Chromatogramm und seine Aussage
Graphische Darstellungen von Peakpaaren mit verschiedener Auflösung
Die Beeinflussung der Auflösung
Totvolumina (extra-column-Volumina)
Tailing
Peakkapazität und statistische Auflösungswahrscheinlichkeit
Temperatureinflüsse in der HPLC
Die Grenzen der HPLC
Wie erreicht man Peakkapazität?
PUMPEN
Allgemeines
Die Kurzhub-Kolbenpumpe
Unterhalt und Reparaturen
Andere Pumpentypen
BEREITSTELLUNG DER APPARATUR BIS ZUR PROBENAUFGABE
Auswahl der mobilen Phase
Vorbereitung der mobilen Phase
Gradientensysteme
Kapillarleitungen
Fittings
Probenaufgabesysteme
Probelösung und Probevolumen
LÖSUNGSMITTELEIGENSCHAFTEN
Tabelle organischer Lösungsmittel
Lösungsmittelselektivität
Mischbarkeit
Puffer
Haltbarkeit von mobilen Phasen
Das Mischungskreuz
DETEKTOREN
Allgemeines
UV-Detektoren
Brechungsindex-Detektoren
Fluoreszenz-Detektoren
Elektrochemische (amperometrische) Detektoren
Lichtstreuungs-Detektoren
Andere Detektoren
Mehrfachdetektion
Indirekte Detektion
Kopplung mit Spektroskopie
SÄULEN UND STATIONÄRE PHASEN
Säulen für die HPLC
Vorsäulen
Allgemeines über stationäre Phasen
Silicagel
Chemisch modifiziertes Silicagel
Styrol-Divinylbenzol
Einige weitere stationäre Phasen
Vorsichtsmaßnahmen und Regeneration
DAS TESTEN VON HPLC-SÄULEN
Einfache Tests für HPLC-Säulen
Bestimmung der Korngröße
Bestimmung der Totzeit
Das Testgemisch
Dimensionslose Größen zur Charakterisierung von HPLC-Säulen
Die van Deemter-Gleichung aus reduzierten Größen und ihre Nützlichkeit für die Säulendiagnose
Van Deemter-Kurven und andere Zusammenhänge
Diffusionskoeffizienten
ADSORPTIONS-CHROMATOGRAPHIE
Was heißt Adsorption?
Die elutrope Reihe
Selektivitätseigenschaften der mobilen Phase
Wahl und Optimierung der mobilen Phase
Anwendungsbeispiele
UMKEHRPHASEN-CHROMATOGRAPHIE
Prinzip
Mobile Phasen in der Umkehrphasen-Chromatographie
Selektivität und Stärke der mobilen Phase
Stationäre Phasen
Methodenentwicklung in der Umkehrphasen-Chromatographie
Anwendungsbeispiele
Hydrophobic-Interaction-Chromatographie
CHROMATOGRAPHIE MIT CHEMISCH GEBUNDENEN PHASEN
Einführung
Eigenschaften spezieller Phasen
Hydrophilic-Interaction-Chromatographie
IONENAUSTAUSCH-CHROMATOGRAPHIE
Einführung
Prinzip
Eigenschaften von Ionenaustauschern
Der Einfluss der mobilen Phase
Spezielle Möglichkeiten für den Ionenaustausch
Praktische Hinweise
Anwendungsbeispiele
IONENPAAR-CHROMATOGRAPHIE
Einführung
Praxis der Ionenpaar-Chromatographie
Anwendungsbeispiele
UV-Detektion mit Hilfe von Ionenpaar-Reagenzien
IONENCHROMATOGRAPHIE
Prinzip
Unterdrückungstechniken
Phasensysteme
Anwendungen
AUSSCHLUSS-CHROMATOGRAPHIE
Prinzip
Das Kalibrierchromatogramm
Molekülmassenbestimmungen von Ausschluss-Chromatographie
Hintereinanderschalten von Ausschluss-Säulen
Phasensysteme
Anwendungen
AFFINITÄTS-CHROMATOGRAPHIE
Prinzip
Affinitäts-Chromatographie als Spezialfall der HPLC
Anwendungsbeispiele
WAHL DER METHODE
Die verschiedenen Möglichkeiten
Methodentransfer
MÖGLICHKEITEN ZUR LÖSUNG DES ELUTIONSPROBLEMS
Das Elutionsproblem
Lösungsmittelgradienten
Säulen zusammenschalten
Comprehensive zweidimensionale HPLC
Die Optimierung eines isokratischen Chromatogramms mit vier Lösungsmitteln
Die Optimierung der übrigen Parameter
Gemischte stationäre Phasen
ANALYTISCHE HPLC
Qualitative Analyse
Spurenanalyse
Quantitative Analyse
Wiederfindung
Peakhöhen- und Peakflächenmessung zur quantitativen Analyse
Integrationsfehler
Die Detektionswellenlänge
Derivatisierung
Unerwartete Peaks:Geister- und Systemspeaks
QUALITÄTSSICHERUNG
Wozu der Aufwand?
Verifizierung mit einer zweiten Methode
Methodenvalidierung
Standard-Arbeitsanweisungen
Messunsicherheit
Qualifikationen, Gerätetest und Systemeignungstest
Qualitätssicherungsmaßnahmen
PRÄPARATIVE HPLC
Problemstellung
Die Praxis der präparativen HPLC
Überladungseffekte
Proben sammeln
Rezyklieren
Verdrängungs-Chromatographie
TRENNUNG VON ENANTIOMEREN
Problemstellung
Chirale mobile Phasen
Chirale flüssige stationäre Phasen
Chirale feste stationäre Phasen
Indirekte Enantiomerentrennung
SPEZIELLE MÖGLICHKEITEN
Mikro-, Kapillar- und Chip-HPLC
Schnelle und superschnelle HPLC
Schnelle Trennungen bei 1000 bar: UPLC
HPLC mit superkritischen mobilen Phasen: SFC
HPLC mit superheißem Wasser
Eletrochromatographie
ANHANG 1: ANGEWANDTE HPLC-THEORIE
ANHANG 2: DURCHFÜHRUNG DES GERÄTETESTS
Allgemeines
Testablauf
Vorbereitung
Leistungsüberprüfung der Pumpen
Leistungsüberprüfung des UV-Detektors
Leistungsüberprüfung des Autosamplers
Leistungsüberprüfung des Säulenofens
Formeln und Berechnungen
Dokumentation
ANHANG 3: URSACHEN UND BEHEBUNG VON PROBLEMEN IN DER HPLC
Druckprobleme
Leck am Pumpensystem
Abweichung von Retentionszeiten
Injektionsprobleme
Basislinienprobleme
Probleme mit der Peakform
Probleme bei Lichtstreuungs-Detektoren (ELSD)
Weitere Ursachen
Leistungsüberprüfung
ANHANG 4: FÜLLEN VON HPLC-SÄULEN