DNA Microarray Analyse von ARI-assoziierten Pathogenen

Akute Atemwegsinfektionen (ARI) sind sowohl in Entwicklungsländern als auch in Industrienationen Ursache hoher Morbidität. Schwierigkeiten bei der Diagnostik bereiten das breite Spektrum der Krankheitserreger und die starke Überlappung der von ihnen verursachten Krankheitsbilder. Gängige Verfahren der Labordiagnostik sind meist Labor- und Kosten-intensiv und sind unter Umständen nicht für alle Erreger verfügbar. Aus diesem Grund sollte ein DNA Microarray entwickelt werden, der die simultane Detektion von bis zu 19 viralen und bakteriellen Erregern in Nasopharyngealsekret von infizierten Patienten ermöglicht. Zur Herstellung der Microarrays wurden Erreger-spezifische PCR-Produkte (126- 463 bp) und Oligonukleotide (17- 30 nt) auf Epoxy-beschichtete Glasobjektträger gespottet. PCR-Produkte wurden zuvor durch PCR amplifiziert und aufgereinigt. Die Sequenzen der Sonden wurden von einem validierten Reverse-Transkriptase-Multiplex-PCR-ELISA Nachweisverfahren übernommen, welches zur Detektion von 19 Erregern entwickelt wurde. Zur Etablierung der Methode wurden Hybridisierungen mit Nukleinsäuren aus Zellkulturüberstand bzw. mit Nukleinsäuren aus Patientenproben durchgeführt.